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    蘇州千舍生物教你如何培養細胞之細胞消化
    發布時間:2020-03-12 點擊量:1055

    蘇州千舍生物教你如何培養細胞之細胞消化

    細胞培養,尤其是細胞系的培養,就細胞消化而言,多做、善于總結,就可以把細胞養的越來越好。

    絕大部分細胞消化只要用胰酶潤洗一遍即可:

    吸去胰酶后,殘留的那些無法計算體積的附著在細胞表面的微量胰酶在37度一般不到2min足夠消化細胞(絕大部分1min不到)。對于這些細胞原則上不要用胰酶孵育細胞,連續這樣傳代,對細胞傷害很大。簡單的程序是PBS潤洗吸去,胰酶潤洗吸去,然后37度消化。

    怎樣算是消化好了呢?

    不需要把細胞全部消化成間隔分布很離散的單個圓形才算消化好了,一般你肉眼觀察貼壁細胞層,只要能移動了,多半呈沙壯移動,其實已經可以了。

    一般能移動了,說明細胞與培養基質材料的附著已經消失了,細胞之間的附著也已經消失了,細胞已經獨立分布了(雖然沒有呈現很廣的離散分布)。這個時候應該停止消化,不要等到看到鏡下所有細胞都分離得非常好,間隙很大,才停止。

    細胞就是完全成單個細胞懸液,之后在貼壁的過程中仍然會聚集,這個是貼壁培養的細胞,尤其是腫瘤細胞的一個特性,你可以嘗試,準備100%的單個細胞懸液,貼壁后觀察細胞,仍然是幾個幾個細胞聚集在一起。

    一些懸浮培養細胞也是如此,容易聚集,不要過幾個小時就拿出來吹打成單細胞懸液。細胞只要能從基質上脫離下來,即使是成片的(比如Calu-3細胞),吹打不超過20次(一般10次即可),成小規模聚集(10個細胞左右)是正常的,不要再去延長消化時間,等待單細胞懸液出現。

    比較難消化的細胞:

    潤洗方法5min還不能消化,以結腸癌細胞為例,比如HCT15、LS411和KM12細胞,胰酶消化,一般10 cm 培養皿,一次多加入300ul-500ul就足夠了。即使這樣難消化的細胞,一般不超過5min,即可見細胞成片移動,就應該停止消化。一些正常細胞也會有難消化的時候,比如tsDC細胞,用胰酶孵育,3min左右即可看到成片沙狀移動。

    常規的細胞實驗,受消化影響不是很大:

    如果不用胰酶去孵育而使用潤洗的方法消化的話(難消化細胞例外)。但少數實驗,比如病毒包裝,對細胞代數,對細胞狀態要求極高。這個時候,胰酶消化,就是潤洗,都會對細胞包裝病毒的能力有影響,傳代次數一多,細胞包裝能力就會逐漸下降。這個時候都不用胰酶消化,用一些鹽溶液(不是EDTA液)即可。這些鹽溶液通過影響細胞外基質相關酶的活性,來使得細胞脫離基質附著表面,但不切割任何蛋白。

    EDTA的作用:

    許多人不用胰酶,只用EDTA,或者用胰酶/EDTA聯合作用。這里要明白,胰酶切割細胞外基質的一些負責粘連和附著的蛋白,而EDTA通過螯合Ca離子,作用于整聯蛋白的活性,所以EDTA的作用更加溫和。有的人在胰酶里添加一些EDTA,或者對付特別難消化的細胞,添加多一些EDTA,就是這個道理。一般不要試圖延長消化時間(如果10min還消化不徹底的話),而應該想其它辦法。

    PBS洗滌:

    消化之前用PBS洗滌,是常見的操作,因為血清中含有抑制胰酶的蛋白。對于一些難消化細胞,可以配制不含Ca,Mg離子的PBS,因為這些離子也會抑制胰酶的活性。但對于絕大部分細胞用胰酶或者EDTA溶液潤洗即可消化,不需要配制不含Ca,Mg離子的溶液。

    每段時間定期對細胞房、培養箱&水盤、水浴鍋、廢液桶等容易染菌的個角落細菌、真菌等微生物的清除,每次操作完都整理好細胞房,帶好手套、口罩、鞋套,防止人為因素污染。一旦發現污染,及時處理。

    Hyclone胎牛血清SH30084.03

    Hyclone胎牛血清SH30406.02

    Hyclone胎牛血清SH30406.05

    Hyclone胎牛血清SH30396.03

    Hyclone胎牛血清SH30070.03

    特級胎牛血清 SH30070.03E

    Hyclone胎牛血清 SH30370.03

    活性炭/葡聚糖胎牛血清 SH30068.03

    活性炭/葡聚糖處理胎牛血清,熱滅活 SH30068.03HI

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    烏拉圭胎牛血清 SV30087. 03

    Hyclone胎牛血清SH30071.03

    Hyclone胎牛血清SV30160.03

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    BOVOGEN新生牛血清 SNCS

    PAA 普通胎牛血清FBS A15-101

    PAA 優等胎牛血清FBS A15-151

    BI優等胎牛血清 04-001-1ACS

    BI ES級別胎牛血清 04-002-1A

    BI 間充質胎牛血清 04-400-1A

    Corning胎牛血清 35-076-CV

    PAN胎牛血清FBS P30-3302

    PAN胎牛血清FBS ST30-3302

    PAN ES級別胎牛血清 ST30-2602

    PAN胎牛血清Plus ST30-3302P

    NTC優等胎牛血清 SFBE

    Gemini優等胎牛血清 900-108

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    Gemini科研用人AB血清100-512

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    Sigma 特級胎牛血清F2442

    Sigma正常人AB血清 H4522

    SBI 無外泌體血清 EXO-FBS-50A-1

    胎牛血清盒裝A31608-02、馬血清16050-122

    雙抗15140-122、SV30010

    胰酶 25200-056、SH30042.01

    GIBCO 胰酶 25200-072

    MCF7/Taxol人乳腺癌紫杉醇耐藥株

    HCT8/5-fu 人回腸直腸腺癌細胞五氟尿嘧啶耐藥株

    LOVO/5-FU 人結腸癌細胞五氟尿嘧啶耐藥株

    HCT116/L人結腸癌奧沙利鉑耐藥細胞

    HL60/ADR人早幼粒急性白血病細胞耐阿霉素株

    PC9GR(PC9R)人肺癌細胞耐吉非替尼

    LOVO/ADR人結腸癌細胞阿霉素耐藥株

    HNE1/DDP人鼻咽癌細胞順鉑耐藥株

    SGC7901/5-fu人胃癌細胞五氟尿嘧啶耐藥株

    A549/DDP人肺癌細胞順鉑耐藥株

    MCF-7/DDP人乳腺癌細胞順鉑耐藥株

    A549/ADR人肺癌細胞阿霉素耐藥株

    SGC7901/DDP人胃癌細胞順鉑耐藥株

    SKOV3/DDP人卵巢癌細胞順鉑耐藥株

    HELA/DDP人宮頸癌耐順鉑細胞株

    NCI-H1650 人肺支氣管癌細胞

    RT4 人膀胱移行細胞乳頭瘤

    SK-N-MC 人神經上皮瘤細胞

    SK-N-SH 人神經母細胞瘤細胞

    SW982 人滑膜肉瘤細胞

    T98G 人膠質母細胞瘤

    U251MG(KO) 人類星形膠質細胞瘤細胞

    U266 人骨髓瘤細胞

    VCAP 人前列腺癌細胞

    hTERT-HPNE 人胰腺導管細胞

    ES-2 人卵巢透明細胞癌細胞

    NCI-H1650人非小細胞肺癌細胞

    H460 人大細胞肺癌細胞

    HACAT 人永生化角質形成細胞

    HCT116 人結腸癌細胞

    HEK293 人胚腎細胞

    HEPG2 人肝癌細胞

    HGC27 人胃癌細胞(未分化)

    HT-29 人結腸癌細胞

    HUVEC 人臍靜脈內皮細胞

    KYSE150人食道癌細胞

    L02(HL7702)人正常肝細胞  

    LOVO 人結腸癌細胞

    MCF-10A人正常乳腺上皮細胞

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    LX-2 人肝星狀細胞

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